Nejen v době vysoké aktivity klíšťat je velmi žádoucí věnovat pozornost možnosti onemocnění, která mohou tito roztoči přenášet. Měření hladiny protilátek proti viru klíšťové encefalitidy je důležitou součástí diagnostiky a odhalení možné infekce, ale také užitečným pomocníkem při monitorování stavu po očkování.
Pro stanovení těchto protilátek se v naší pražské laboratoři využívá imunoanalytický analyzátor Agility od výrobce TestLine Clinical Diagnostics. Protilátky je možné stanovit ve třídě IgM a IgG. Je-li vzorek pozitivní ve třídě IgM, následuje dále stanovení tzv. avidity IgG protilátek. Tento parametr pomáhá odlišit časnou fázi infekce a infekci prodělanou před delším časovým obdobím. Pro závažnost onemocnění jsou výsledky nasvědčující probíhající infekci vždy konzultovány s ošetřujícím lékařem s ohledem na klinický stav pacienta.
Imunoanalýza v diagnostické laboratoři může mít mnoho podob a variant. Vždy záleží na druhu nosiče, na který je nanesen daný reaktant – může se jednat o povrch plastové reakční jamky, magnetické mikročástice či například plastové kuličky. Jednotlivé přístroje využívají také různé způsoby detekce podle použitého značení v reakci. Při diagnostice protilátek proti viru klíšťové encefalitidy se jedná o enzymatickou imunoanalýzu. Jak již vyplývá z názvu této hojně využívané metodiky, ke značení se v tomto případě během reakce využívá enzym a výslednou intenzitu zabarvení lze změřit pomocí spektrofotometru.
Princip testu využívá imunoanalytickou reakci, tedy reakci mezi antigenem a protilátkou.
Každý pacient je analyzován v jedné reakční jamce, kde postupně probíhají veškeré kroky reakce. Celý proces od pipetování vzorků a reagencií až po odečítání změřených výsledků provádí analyzátor Agility automaticky. Na dně každé reakční jamky je již při výrobě nanesen antigen specifický pro virus klíšťové encefalitidy. Jsou-li v pacientském vzorku přítomny protilátky proti tomuto viru, v počátku analýzy dojde k jejich navázání na tento antigen. V dalším kroku je do reakce přidán konjugát – reagencie obsahující zvířecí protilátku, která je označena enzymem. Dojde-li tedy v prvním kroku k navázání protilátek ze vzorku na antigen, ve druhém kroku se zvířecí konjugát na pacientovy protilátky naváže a enzymaticky je označí.
Aby bylo možné vyhodnotit celkové množství protilátek ve vzorku, dochází v závěru
analýzy k enzymové reakci. Je-li vzorek pozitivní, v průběhu enzymové reakce dochází k barevné změně a obsah reakční jamky zmodrá. Pro zastavení reakce je v posledním kroku testu do reakční směsi přidán roztok kyseliny a obsah jamky získá žlutou barvu. Na základě intenzity barvy je tedy analyzátor schopen vypočítat hodnotu detekovaných protilátek ve vzorku. Čím silnější je intenzita zabarvení, tím je hladina protilátek ve vzorku vyšší. Celý proces analýzy trvá dvě až tři hodiny.
Správná a rychlá interpretace výsledků může odhalit časné fáze infekce i bez přítomnosti klinických příznaků, stejně tak jako napovědět, zda není nutné pacienta přeočkovat.
Ing. Václava Susan Holinková
VŠ pracovník analytik s AKK pracující pod
odborným dohledem
