Významná slovenská lékařka MUDr. Katarína Melišová se věnuje genetice dlouhodobě, už od svých univerzitních studií, a své bohaté zkušenosti teď na univerzitě předává dalším studentům. Povídali jsme sis ní nejen o genetice, o možnostech nově prováděného testu neoBona® a základního screeningu NIPT nebo o spolupráci se SYNLABem, ale i tom, co radí budoucím matkám bez ohledu na výsledky laboratorních vyšetření.
Jak jste se dostala ke genetice, vašemu současnému hlavnímu oboru?
Po skončení lekárskej fakulty UK Bratislava som nastúpila na Katedru biológie a parazitológie, kde som robila na Oddelení humánnej genetiky – do klinickej praxe sme tu zaviedli metodiku kultivácia buniek plodovej vody, inými slovami prenatálnu genetickú diagnostiku. Rozvinuli sme metodiku postmortálneho cytogenetického vyšetrenia, čo bolo neskôr aj témou mojej dizertačnej práce. Na katedre som sa venovala pedagogickej a vedecko-výskumnej činnosti, po 12 rokoch som sa rozhodla pre kliniku. Nastúpila som na I. gynekologicko-pôrodnícku kliniku LFUK a FNsP Bratislava, kde som sa zapojila do práce laboratória IVF. Popri tom som sa venovala pacientkám na oddelení, spravila som si atestáciu z gynekológie a pôrodníctva a následne atestáciu z lekárskej genetiky. Odvtedy sa venujem lekárskej genetike, predovšetkým v oblasti prenatálnej diagnostiky a reprodukcie. Podarilo sa nám prvým na Slovensku zaviesť DNA diagnostiku aneuploídií – QFPCR do praxe, čo významne skrátilo diagnostiku najčastejších aneuploídií a stres tehotných žien v riziku. Uplynulo už 10 rokov, čo sme v spolupráci s pražským pracoviskom Gennet začali robiť NIPT Prenascan.
Představíte nám vaše aktuální působiště?
V súčasnosti pôsobím na Oddelení lekárskej genetiky UNB a LFUK Bratislava, kde sa venujem ambulantnej činnosti. Naše pracovisko patrí pod Ústav lekárskej biológie, genetiky a klinickej genetiky LFUK a UNB, súčasťou je Oddelenie molekulovej a biochemickej genetiky. Okrem ambulantnej činnosti sa venujem pedagogickej činnosti predmetu lekárska genetika v pregraduálnom období. V ambulantnej činnosti sa venujem
predovšetkým reprodukčnej genetike.
O NIPT TESTECH
Dnes je na trhu vícero NIPT testů. Některé z nich analyzují i přítomnost vzácných genetických onemocnění. Jaký je váš pohled na tento typ
testování?
Prvé NIPT testy boli vyvinuté na detekciu pohlavia a Rh faktora, neskôr najčastejších
trizómií, t.j. trizóme 21, 18, 13. Ich senzitivita a špecificita je v porovnaní s klasickými
biochemickými skríningamii vyššia. Postupne sa NIPT testy začali vyvíjať aj na zisťovanie
rizika vzácnych genetických ochorení. Ide predovšetkým o vzácne aneuploídie (chromozómy 9, 16, 22) mikrodelečno/mikroduplikačné syndrómy (CNV zmeny)
a neskôr aj na vybrané monogénovo podmienené genetické ochorenia. Tehotné ženy
si spravidla samy vyberajú typ a verziu NIPT testu bez ohľadu na reálne riziká. Pričom pri
prenatálnej genetickej diagnostike u tehotných zistíme konkrétne riziká, a tie vyšetrujeme.
Pri zisťovaní NIPT rizík mikroduplikácií/mikrodelécií sa pri konfirmačných vyšetreniach
stretávame často s falošnou pozitivitou, teda so zbytočným strachom u tehotných. Niektoré NIPT testy zisťujú riziko najčastejšieho patogénneho variantu u cystickej fibrózy, alebo niekoľkých patogénnych variantov pri Smith – Lemli – Opitzovom syndróme. Preto negatívny výsledok riziko daného ochorenia zníži iba čiastočne. Odber plodovej vody je „zlatým štandardom“ prenatálnej diagnostiky, robí sa u nás 40 rokov. Komplikácie sa u skúsených gynekológov vyskytujú zriedkavo (cca 0,1 – 0,2 %). Podľa môjho názoru by pri rozšírenej verzii NIPT by mala byť každá tehotná konzultovaná klinickým genetikom.
Jaké očekávání by měla mít pacientka od NIPT? Dostanou pacientky před tímto vyšetřením nějaké instrukce, které by měly dodržovat?
Pred plánovaním NIPT by mala byť každá pacientka poučená. Pri rozšírených typoch
testov odporúčame konzultáciu klinickým genetikom. Od konzultácie potom závisia
očakávania pacientky. V prvom rade treba klásť dôraz na tú skutočnosť, že testy sú skríningové, a nie diagnostické. Môžu mať falošnú pozitivitu aj falošnú negativitu. Nie
všetky tehotné by mali absolvovať NIPT. Pri patologickom UZ náleze, alebo pri vysokom
riziku chromozómovej aberácie odporúčame prednostne prenatálnu diagnostiku. Takýto
postup volíme aj u pacientiek vo vyššom gestačnom týždni, kedy by sa nestihla konfirmačná prenatálna diagnostika.
DIAGNOSTIKA POMOCÍ TESTU NEOBONA®
Můžete popsat všechny možnosti nově prováděného testu neoBona® a základní screening NIPT?
NIPT neoBona s vysokou senzitivitou 99,9 % dokáže zistiť zmeny počtu chromozómov 21,
18, 13 a stanoviť pohlavie plodu. Senzitivita pre monozómiu X predstavuje 90 %. Táto metóda je akreditovaná. Test je validovaný pre jedno a dvojplodovú graviditu. Dá sa uskutočniť od 11 týždňa gravidity. U jednoplodovej gravidity dokáže zachytiť trizómie
chromozómov 21, 18, 13 a aneuploídie pohlavných chromozómov. V prípade, že si to pacientka neželá, nebude o pohlaví plodu informovaná. U dvojplodovej gravidity test dokáže zistiť trizómie chromozómov 21, 18 a 13 a detekuje aj chromozóm Y, čo poukazuje na skutočnosť, že aspoň jeden plod je mužského pohlavia.
NIPT neoBona GenomeWide dokáže zistiť zmeny počtu všetkých chromozómov, t.j. autozómových (chromozómy 1-22), aj gonozómových (pohlavné chromozómy). Takisto vie zachytiť aj mikrodelécie (nadbytočný genetický materiál) a mikroduplikácie (chýbajúci genetický materiál) v rámci celého genómu v rozsahu nad alebo rovnajúcu sa 7 Mb. U dvojplodovej gravidity tento test zistí aneuploídie všetkých autozómových chromozómov, zistí prítomnosť chromozómu Y a zachytí mikrodelécie a mikroduplikácie v rámci celého genómu nad alebo rovnajúcu sa 7 Mb. Test je vhodný pre všetky typy tehotenstiev –jednoplodové, dvojplodové, gravidity po IVF, gravidity s darovanými pohlavnými bunkami a embryami, ako aj pre gravidity, kde došlo k zástave vývoja jedného embrya/plodu, kým druhé embryo sa vyvíja ďalej.
Jak přesně tento neinvazivní prenatální test probíhá?
Vo veľkej časti tento test indikuje gynekológ, ktorý sa stará o tehotnú. V menšine prípadov ho indikuje klinický genetik, ktorý vysvetlí tehotnej výhody a limitácie testu. Následne tehotnej odoberieme periférnu krv do špeciálnej odberovej skúmavky a vzorku so žiadankou odosielame do laboratória SYNLAB, ktoré ju zasiela na zahraničné pracovisko, kde je vzorka analyzovaná. V priebehu 5 pracovných dní indikujúci lekár dostáva výsledok elektronicky a informuje tehotnú.
V jakých situacích mohou nastat falešně pozitivní a negativní výsledky?
Pri konzultácii s tehotnou je bezpodmienečne potrebné vysvetliť, že sa nejedná o diagnostický, ale skríningový test. Oproti klasickým biochemickým testom má vyššiu senzitivitu, pretože neanalyzuje hladiny biochemických parametrov a ich pomery, ale hodnotí voľne cirkulujúcu fetálnu DNA, presnejšie DNA z placenty a priamo vyhľadáva patologické stavy. Výsledky nemusia vždy korešpondovať s genetickou výbavou plodu. Môžu byť falošne pozitívne, alebo falošne negatívne. Jednou z príčin je fenomén lokálneho placentárneho mozaicizmu, kedy má placenta inú genetickú výbavu ako plod (napr. v placente je trizómia 21 a plod túto trizómiu nemá). Predpokladá sa, že tento jav sa vyskytuje v 1 – 2 % tehotenstiev. Mozaicizmus (organizmus je tvorený viacerými líniami buniek s rôznou genetickou informáciou; vznikajú nesprávnym rozdelením genetickej výbavy jedného jedinca) sa môže vyskytovať aj u plodu samotného, kedy sa odlišné bunkové línie nachádzajú v rôznych tkanivách. Zistenie predovšetkým nízko zastúpeného mozaicizmu nie je NIPT schopný odhaliť. U tehotných, ktoré majú mozaikový karyotyp (predovšetkým sa to týka chromozómu X), nemusí NIPT správne stanoviť počet pohlavných chromozómov X. Podobne tento test nevie odhaliť chimérizmus
(organizmus tvorený bunkami viac ako jedného jedinca). Ďalšou limitáciou NIPT je nemožnosť zistenia polyploídie (organizmus s viac ako dvomi sadami chromozómov; v praxi sa stretávame predovšetkým s triploídiou – 3 sady a zriedkavo s tetraploídiou – 4 sady chromozómov). V prípade, že tehotná má onkologické ochorenie, NIPT môže falošne
priradiť chromozómové zmeny plodu. Test nie je možné vykonať u tehotných, ktoré v priebehu posledných niekoľko týždňov dostali transfúziu, alebo im bola robená transplantácia, či podstupujú imunoterapiu. NIPT nie je schopný odhaliť vyvážené chromozómové prestavby, ktoré diagnostikuje cytogenetická metóda. U dvojplodovej tehotnosti nevieme jednotlivým plodom prisúdiť patologický nález ani pohlavie a nevieme sa vyjadriť k aneuploídiám pohlavných chromozómov. V niektorých prípadoch sa nedá zo vzorky získať dostatočný podiel fetálnej DNA – fetálnej frakcie. Ide o situácie, ak sa vzorka odoberá vo včasných štádiách tehotenstva, ak je tehotná obézna alebo ak dostáva v tehotenstve nízkomolekulárne heparíny. V takýchto prípadoch sa odporúča odber opakovať s odstupom času.
ZVÝŠENÍ PŘESNOSTI ZÁCHYTU
Jaké největší výhody shledáváte s příchodem diagnostiky pomocí testu neoBona®?
Test neoBona využíva inovované technológie ako je NGS s párovým koncovým čítaním, čo umožňuje lepšie rozlíšenie fetálnej DNA od maternálnej. Tento prístup umožňuje testovanie aj zo vzoriek, kde je nízka fetálna frakcia, t.j. od 1 %. Nová technológia takisto zvyšuje presnosť detekcie chromozómovej patológie. Pri hodnotení mikrodelečno/mikroduplikačnej patológie využíva WGS, čo sa podieľa na zvýšení presnosti záchytu. Výsledky vyšetrenia sú k dispozícii do 5 pracovných dní. Analýzu
vzoriek uskutočňuje spoľahlivé laboratórium v Španielsku s dlhoročnými skúsenosťami s akreditovanými testami.
Hradí toto vyšetření pojišťovny?
Vyšetrenie na Slovensku nehradia všetky poisťovne. Štátna Všeobecná zdravotná poisťovňa uhrádza testovanie na odporúčanie lekára ženám vo veku do 35 rokov
v maximálnej sume 450 Eur v prípade, že táto žena má v Peňaženke zdravia MAXI plný počet členov, t.j. 8, ktorí sú poistencami VšZP. Ostatné poisťovne test nehradia.
Jak vznikla vaše spolupráce s firmou SYNLAB a co vše obsahuje?
Prax na Slovensku s NIPT testovaním ukazuje, že absolútna väčšina testov prechádza cez
gynekologické ambulancie a na genetické pracoviská sa dostávajú sporadicky. Tehotné s indikáciou k prenatálnej genetickej diagnostike prichádzajú na genetickú konzultáciu a okrem biochemického skríningu majú urobený aj niektorý zo širokej ponuky NIPT testov. Preto sa naše pracovisko s jednotlivými NIPT testami stretáva predovšetkým v oblasti konzultačnej a konfirmačnej v rámci Bratislavy a okolitého regiónu.
DOPORUČENÍ PRO PACIENTKY
Máte doporučení pro těhotné, co se týče prevence? V čem pacientky opakovaně chybují?
Lekárska genetika je odbor, ktorý sa predovšetkým venuje prevencii geneticky podmienených ochorení. Diagnostikuje genetické ochorenia a vyhľadáva rizikových členov rodín. Odporúčame preto navštíviť genetickú ambulanciu ešte pred plánovaním rodičovstva, ak sa v rodine vyskytuje geneticky podmienené ochorenie, aby sme mohli stanoviť riziko pre budúci pár a správne nastaviť starostlivosť v prenatálnom období.
Prevencia v záchyte trizómií u plodov závisí od gynekológov, akú stratégiu vyhľadávania
rizikových pacientiek zvolia. Jedná sa o kombináciu biochemických, NIPT a USG skríningových vyšetrení. Z hľadiska genetiky trizómií, ako sú Downov, Edwardsov a Patauov syndróm, je vo veľkej väčšine prípadov prevenciou počatie pred 35. rokom matky. Je to dané tým, že riziko nesprávneho rozdelenia chromozómov výrazne stúpa s vekom žien. Na základe štatistických údajov je však trend plánovania rodičovstva čoraz vo vyššom veku. Preto ak môžem poradiť budúcim matkám, odporúčam tehotenstvo neodkladať, aby znížili riziko počatia s numerickou chromozómovou aberáciou.
Co Vás nejvíce na vaší práci naplňuje?
Genetika ma zaujala už počas vysokoškolského štúdia a začala som sa jej venovať ako študentka. Odvtedy sa odbor nesmierne rozvinul, ide sa čím ďalej, tým viac do hĺbky. To je na nej tak fascinujúce. Čím viac toho poznávame, tým viac si uvedomujem, že toho oveľa viac nevieme. Na mojej práci ma napĺňa predovšetkým práca s ľuďmi a zadoosťučinenie, keď im vylúčime resp. minimalizujeme konkrétne riziká a strach z ochorenia.
Mgr. Kristýna Žáčková
Marketing Specialist